黄芪甲苷的测定
黄芪甲苷的测定（HPLC-ELSD法）
1．范围
本标准适用于测定黄芪(Astragalus Root, RADIX ASTRAGALI，A.membranaceus(Fisch.)Bge豆科)中黄芪甲苷(astragaloside)的含量。
2．原理
黄芪甲苷在紫外区吸收差（它的 吸收波长为200．8nm），改用ELSD后，所用的流动相全部蒸发，不干扰测定，因此灵敏度高，而稳定性及重现性均符合测定要求。
3．试剂
3.1 重蒸水
3.2 乙腈（色谱纯）
3.3 甲醇（分析纯）
3.4 黄芪甲苷标准品（astragaloside Ⅳ，C41H68O14）
4． 仪器
4.1 高效液相色谱仪（配色谱工作站）
4.2 分析天平（1/10000）
4.3 超声波清洗仪
4.4 0.45 m 微孔过滤器
4.5 ELSD检测仪（Alltech 2000）
4.6容量瓶
4.7带塞小玻璃瓶
4.8 色谱柱 Shimpack VP-ODS C18 5 m 4.6150mm
5．分析步骤
5.1黄芪甲甙标准品储备溶液：称取10mg黄芪甲甙标准品置于50ml的容量瓶中，用甲醇溶解，超声冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤，于冰箱中保存。
5.2黄芪甲甙标准品供试液：取黄芪甲甙标准储备溶液0.0、1.0、2.0、3.0、5.0、7.0、9.0、10.0ml置于10ml的容量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀，即为供试液。
5.3 待测样品供试液
5.3.1精确称取50mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超声溶解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。
5.3.2精密称取本品粗粉约1.5g，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，回流4h，提取液回收甲醇并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水3－5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并定容至2ml，摇匀，即得供试品溶液。
5.3.3供试样品溶液的制备：精密称取黄芪药材粉末2g，加2%的氢氧化钠甲醇溶液30ml，回流提取3次，每次1h。合并提取液，放置在水浴上蒸干，残渣加水30毫升溶解，转移至分液漏斗中，加氯仿——正丁醇（2：1）振摇提取4次。每次20ml；合并提取液，蒸干，残渣用甲醇转移至5毫升容量瓶中。
5.4 色谱条件
5.4.1 流动相 A：水 B：乙腈
A : B = 66 : 34 ( V / V ，等梯度)
流速 1.0ml/min
漂移管温度： 100℃
气体流速： 2.7L/min
进样量： 10l
柱温： 30℃（见图）
5.4.2流动相 甲醇—水（75：25）
流速 1.0ml/min
漂移管温度： 75℃
气体流速： 2.0L/min
进样量： 10l
柱温： 30℃ （见图1）
5.5 线性范围
分别精确吸取上述对照品溶液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0ul注入液相色谱仪中，以峰面积的自然对数为横坐标，以浓度的自然对数为纵坐标，作图，线性回归方程为：Y=0.731X—4.13；线性范围为1.0——5.0mg，相关系数r=0.9996。
5.6 样品的测定：
精确吸取待测样品供试液10l，注入液相色谱仪，得出峰面积。将峰面积及浓度均取自然对数后，用外标法计算，求出供试品浓度的自然对数，再转换成供试品的含量。
5.7 计算：
将样品的峰面积的自然对数带入线性回归方程Y=aX+b
其中： Y 为峰面积的自然对数
X 为进样量（g）的自然对数
a 为线性方程的斜率
b 为线性方程的截距
1．范围
本标准适用于测定黄芪(Astragalus Root, RADIX ASTRAGALI，A.membranaceus(Fisch.)Bge豆科)中黄芪甲苷(astragaloside)的含量。
2．原理
黄芪甲苷在紫外区吸收差（它的 吸收波长为200．8nm），改用ELSD后，所用的流动相全部蒸发，不干扰测定，因此灵敏度高，而稳定性及重现性均符合测定要求。
3．试剂
3.1 重蒸水
3.2 乙腈（色谱纯）
3.3 甲醇（分析纯）
3.4 黄芪甲苷标准品（astragaloside Ⅳ，C41H68O14）
4． 仪器
4.1 高效液相色谱仪（配色谱工作站）
4.2 分析天平（1/10000）
4.3 超声波清洗仪
4.4 0.45 m 微孔过滤器
4.5 ELSD检测仪（Alltech 2000）
4.6容量瓶
4.7带塞小玻璃瓶
4.8 色谱柱 Shimpack VP-ODS C18 5 m 4.6150mm
5．分析步骤
5.1黄芪甲甙标准品储备溶液：称取10mg黄芪甲甙标准品置于50ml的容量瓶中，用甲醇溶解，超声冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤，于冰箱中保存。
5.2黄芪甲甙标准品供试液：取黄芪甲甙标准储备溶液0.0、1.0、2.0、3.0、5.0、7.0、9.0、10.0ml置于10ml的容量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀，即为供试液。
5.3 待测样品供试液
5.3.1精确称取50mg提取物于50ml容量瓶中，用甲醇超声溶解，冷却定容，0.45 m微孔滤膜过滤为供试液。
5.3.2精密称取本品粗粉约1.5g，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，回流4h，提取液回收甲醇并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水3－5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并定容至2ml，摇匀，即得供试品溶液。
5.3.3供试样品溶液的制备：精密称取黄芪药材粉末2g，加2%的氢氧化钠甲醇溶液30ml，回流提取3次，每次1h。合并提取液，放置在水浴上蒸干，残渣加水30毫升溶解，转移至分液漏斗中，加氯仿——正丁醇（2：1）振摇提取4次。每次20ml；合并提取液，蒸干，残渣用甲醇转移至5毫升容量瓶中。
5.4 色谱条件
5.4.1 流动相 A：水 B：乙腈
A : B = 66 : 34 ( V / V ，等梯度)
流速 1.0ml/min
漂移管温度： 100℃
气体流速： 2.7L/min
进样量： 10l
柱温： 30℃（见图）
5.4.2流动相 甲醇—水（75：25）
流速 1.0ml/min
漂移管温度： 75℃
气体流速： 2.0L/min
进样量： 10l
柱温： 30℃ （见图1）
5.5 线性范围
分别精确吸取上述对照品溶液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0ul注入液相色谱仪中，以峰面积的自然对数为横坐标，以浓度的自然对数为纵坐标，作图，线性回归方程为：Y=0.731X—4.13；线性范围为1.0——5.0mg，相关系数r=0.9996。
5.6 样品的测定：
精确吸取待测样品供试液10l，注入液相色谱仪，得出峰面积。将峰面积及浓度均取自然对数后，用外标法计算，求出供试品浓度的自然对数，再转换成供试品的含量。
5.7 计算：
将样品的峰面积的自然对数带入线性回归方程Y=aX+b
其中： Y 为峰面积的自然对数
X 为进样量（g）的自然对数
a 为线性方程的斜率
b 为线性方程的截距